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默克的液相色譜柱要如何選

更新時(shí)間:2024-01-05 瀏覽次數(shù):758

在選擇色譜柱之前,先多了解自己的樣品和雜質(zhì),他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等,

 
1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測(cè),即要選擇承受100%純水且對(duì)極性化合物保留很好的色譜柱
 

2.如果樣品極性太強(qiáng),或酸性太強(qiáng);可以選擇CN,NH2,或硅膠柱,HILIC(親水色譜),也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱(缺點(diǎn)是離子對(duì)試劑平衡時(shí)間長,對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密,否則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn),另外離子對(duì)試劑很難洗下來,基本上用了離子對(duì)的色譜柱就不能再用于其它實(shí)驗(yàn))

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3.若樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質(zhì),且硅膠端基封尾)或一些經(jīng)過修飾的C18柱(如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等),他們都會(huì)減少堿性化合物的拖尾,一般會(huì)選擇中性或偏堿的條件下做,因?yàn)檫@樣可增加堿性樣品的保留
 
4.如果堿性化合物的極性太強(qiáng),或堿性太強(qiáng);可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(cè)(優(yōu)點(diǎn)是方法開發(fā)簡單,缺點(diǎn)是目前實(shí)現(xiàn)這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少,價(jià)格也高)或者選用HILIC色譜柱(硅膠柱在反相條件下使用,這也是很經(jīng)典的檢測(cè)堿性樣品的方法)選擇強(qiáng)離子交換柱(缺點(diǎn)是不能用來分析其它樣品,對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密,否則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn))也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱。
 
影響因素
 
A:物理因素1.硅膠純度----·填料硅膠的純度與殘留金屬離子濃度
 
2.色譜柱尺寸---填料床的長度和內(nèi)徑
 
3.顆粒形狀------球型或不規(guī)則型
 
4.粒徑------------平均顆粒直徑,通常3-10µm
 
5.表面積---------顆粒外表面和內(nèi)部孔表面的總和,以m2/gram表示
 
6.孔徑------------顆粒的孔或腔的平均尺寸,范圍80-300&Aring


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