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高效液相色譜:檢測(cè)器的類型及性能評(píng)價(jià)

更新時(shí)間:2023-01-12 瀏覽次數(shù):1569

        高效液相色譜儀中的檢測(cè)器是三大關(guān)鍵部件(高壓輸液泵、色譜柱、檢測(cè)器)之一,主要用于監(jiān)測(cè)經(jīng)色譜柱分離后的組分濃度的變化,并由記錄儀繪出譜圖來(lái)進(jìn)行定性、定量分析。常用的檢測(cè)器有紫外吸收檢測(cè)器(UVD)、折光指數(shù)檢測(cè)器(RID)、電導(dǎo)檢測(cè)器(ECD)和熒光檢測(cè)器。



檢測(cè)器的分類

   

按檢測(cè)的對(duì)象分類

  (1)整體性質(zhì)檢測(cè)器    檢測(cè)從色譜柱中流出的流動(dòng)相總體物理性質(zhì)的變化情況。如折光指數(shù)檢測(cè)器(RID)和電導(dǎo)檢測(cè)器(CD),它們分別測(cè)定柱后流出液總體的折射率和電導(dǎo)率。此類檢測(cè)器測(cè)定靈敏度低,必須用雙流路進(jìn)行補(bǔ)償測(cè)量;易受溫度和流量波動(dòng)的影響,造成較大的漂移和噪聲;不適合于痕量分析和梯度洗脫。


  (2) 溶質(zhì)性質(zhì)檢測(cè)器    此類檢測(cè)器只檢測(cè)柱后流出液中溶質(zhì)的某物理或化學(xué)性質(zhì)的變化。例如,紫外吸收檢測(cè)器(UVD)和熒光檢測(cè)器(FD),它們分別測(cè)量溶質(zhì)對(duì)紫外光的吸收和溶質(zhì)在紫外光照射下發(fā)射的熒光強(qiáng)度。此類檢測(cè)器靈敏度高,可單流路或雙流路補(bǔ)償測(cè)量,對(duì)流動(dòng)相流量和溫度變化不敏感。但不能使用對(duì)紫外線有吸收的流動(dòng)相。它們可用于痕量分析和梯度洗脫。


按適用性分類

   (1) 擇性檢測(cè)器    它對(duì)不同組成的物質(zhì)響應(yīng)差別極大,因此只能選擇性地檢測(cè)某些物質(zhì),如紫外吸收檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器和電導(dǎo)檢測(cè)器。

  (2) 通用型檢測(cè)器  它對(duì)大多數(shù)物質(zhì)的響應(yīng)相差不大, 幾乎適用于所有物質(zhì)。折光指數(shù)檢測(cè)器屬于通用型檢測(cè)器,但它的靈敏度低,受溫度影響波動(dòng)大,使用時(shí)有一定局限性。

    上面提到的UVD,RID,F(xiàn)D,ECD 4種檢測(cè)器皆屬于非破壞性檢測(cè)器,樣品流出檢測(cè)器后可進(jìn)行餾分收集,并可與其它檢測(cè)器串聯(lián)使用。對(duì)熒光檢測(cè)器因測(cè)定中加入熒光試劑,其對(duì)樣品會(huì)產(chǎn)生玷污,當(dāng)串聯(lián)使用時(shí)應(yīng)將它放在最后檢測(cè)。


檢測(cè)器的性能指標(biāo)

   

     檢測(cè)器的性能指標(biāo)見(jiàn)表2-2。


圖片


檢測(cè)器的性能評(píng)價(jià)

      在評(píng)價(jià)檢測(cè)器時(shí),要強(qiáng)調(diào)以下幾點(diǎn):

    (1) 噪聲   通常噪聲是指由儀器的電器元件、溫度波動(dòng)、電壓的線性脈沖以及其它非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無(wú)規(guī)則波動(dòng)高頻噪聲似“絨毛"使基線變寬;短周期噪聲是記錄器的基線變化,呈無(wú)規(guī)則的峰或谷。噪聲的存在會(huì)降低檢測(cè)靈敏度,嚴(yán)重時(shí)使儀器無(wú)法工作。


    (2) 基線漂移   漂移是基線的一種向上或向下的緩慢移動(dòng),可在較長(zhǎng)時(shí)間(0.5~1.0 h)內(nèi)觀察到。它可掩蔽噪聲和小峰。漂移與整個(gè)液相色譜系統(tǒng)有關(guān),而不僅是由檢測(cè)器引起的。


   (3) 靈敏度(最小檢出濃度或最小檢出量)   在一個(gè)特定分離工作中,檢測(cè)器是否有足夠的靈敏度十分重要。當(dāng)比較檢測(cè)器時(shí),常使用敏感度這一性能指標(biāo)。敏感度即指信號(hào)與噪聲的比值(信噪比)等于2時(shí),在單位時(shí)間內(nèi)進(jìn)入檢測(cè)器的溶質(zhì)的濃度或質(zhì)量。

  (4)線性范圍     在進(jìn)行定量分析時(shí),希望檢測(cè)器有較寬的線性范以便在一次分析中可對(duì)主要組分和痕量組分同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。

 (5)檢測(cè)器的池體積  它應(yīng)小于最早流出的死時(shí)間色譜峰的洗脫體積的1/10,否則會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的柱外譜帶擴(kuò)展。



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